Stable cell lines establishment
不變細胞株構建
慢病毒載體（Lentiviral vector, LVs）是在HIV-1病毒根本上革新而成的病毒載體體系，它能高效將目標基因（或RNAi）導入植物和人的原代細胞或細胞系。慢病毒載體基因組是正鏈RNA，其基因組進入細胞后，在細胞漿中被其本身照顧的反轉錄酶反轉為DNA，構成DNA整合前復合體，進入細胞核后，DNA整合到細胞基因組中。整合后的DNA轉錄mRNA，回到細胞漿中，抒發目標卵白；或發生RNAi攪擾。
慢病毒載體介導的基因抒發或RNAi攪擾感化延續且不變，緣由是目標基因整合到宿主細胞基因組中，并隨細胞基因組的割裂而割裂。別的，慢病毒載體能有用傳染并整合到非割裂細胞中。以上特征使慢病毒載體與別的病毒載體比擬，比方不整合的腺病毒載體、整合率低的腺相干病毒載體、只整合割裂細胞的傳統逆轉錄病毒載體，有光鮮的特點。大批文獻研討標明，慢病毒載體介導的目標基因持久抒發的構造或細胞包含腦、肝臟、肌肉、視網膜、造血干細胞、骨髓間充質干細胞、巨噬細胞等，又很少激發機體免疫反映，能到達杰出的基因醫治結果，具備廣漠的利用遠景。已成為國際上最通用的轉染體系之一，普遍用于各種嘗試室。
我司接納的慢病毒載體屬于“第三代”慢病毒載體，其基因組的3’LTR的加強子功效發生了缺失，從而構成了所謂的“自滅活”（Self-inactivation，SIN），即該病毒基因組整合到細胞基因組后，不會發生新的子代病毒，也下降了對四周基因的不測激活，是以具備較好的寧靜性。
我司慢病毒載體體系由抒發載體pLenti-gene、包裝幫助載體pGag/Pol和pRev、包膜載體pVSV-G四質粒構成。能夠按照嘗試目標接納差別的抒發載體pLenti-gene，如基因抒發研討接納pLV-Gene、RNA 攪擾接納pLV-U6等停止研討。pGag/Pol載體中含有HIV 病毒的gag 基因，編碼病毒首要的布局卵白；pol 基因，編碼病毒特同性的酶；pRev 載體編碼rev 基因，是調理gag 和pol 基因抒發的調理因子。pVSV-G載體中含有純真皰疹病毒來歷的VSV-G 基因，供給病毒包裝所需要的包膜卵白。
